13/05/2020
INFORMACIÓN COMO MEDICO VETERINARIO.
Sobre una serie de preguntas que muchas personas me hacen acerca del uso de la IVERMECTINA en el tratamiento del SARS-2 o COVID-19 quiero compartirles información científica; leer detenidamente y tomar luego sus conclusiones.
La Ivermectina es un agente antiparasitario de amplio espectro aprobado por la FDA ( González Canga et al., 2008 ) que en los últimos años, junto con otros grupos, ha demostrado tener actividad antiviral contra una amplia gama de virus ( Gotz et al. ., 2016 ; Lundberg et al., 2013 ; Tay et al., 2013 ; Wagstaff et al., 2012 ) in vitro . Originalmente identificado como un inhibidor de la interacción entre la proteína integrasa (IN) del virus de inmunodeficiencia humana (VIH-1) y el heterodímero α / β1 importina (IMP) responsable de la importación nuclear de IN ( Wagstaff et al., 2011 ), Ivermectina tiene desde entonces se confirmó que inhibe la importación nuclear de IN y la replicación del VIH-1 ( Wagstaff et al., 2012) Se han informado otras acciones de ivermectina ( Mastrangelo et al., 2012 ), pero se ha demostrado que la ivermectina inhibe la importación nuclear del huésped (p. Ej. ( Kosyna et al., 2015 ; van der Watt et al., 2016 )) y viral proteínas, incluyendo el virus del simio SV40 antígeno tumoral grande (T-ag) y el virus del dengue (DENV) proteína no estructural 5 ( Wagstaff et al., 2012 , Wagstaff et al., 2011 ). Es importante destacar que se ha demostrado que limita la infección por virus de ARN como DENV 1-4 ( Tay et al., 2013 ), Virus del Nilo Occidental ( Yang et al., 2020 ), virus de la encefalitis equina venezolana (VEEV) ( Lundberg et al. ., 2013 ) e influenza ( Gotz et al., 2016), con esta actividad de amplio espectro que se cree que se debe a la dependencia de muchos virus de ARN diferentes en IMPα / β1 durante la infección ( Caly et al., 2012 ; Jans et al., 2019 ). Se ha demostrado que la ivermectina es eficaz contra el virus de la seudorrabia del virus del ADN (PRV) tanto in vitro como in vivo , con un tratamiento con ivermectina que aumenta la supervivencia en ratones infectados con PRV ( Lv et al., 2018 ). No se observó eficacia para la ivermectina contra el virus del Zika (ZIKV) en ratones, pero los autores reconocieron que las limitaciones del estudio justificaron la reevaluación de la actividad anti-ZIKV de la ivermectina ( Ketkar et al., 2019) Finalmente, la ivermectina fue el foco de un ensayo clínico de fase III en Tailandia en 2014–2017, contra la infección por DENV, en el que se observó que una dosis oral diaria única era segura y resultó en una reducción significativa en los niveles séricos de proteína NS1 viral, pero No se observaron cambios en la viremia o el beneficio clínico ( Yamasmith et al., 2018 ).
El agente causal de la pandemia actual de COVID-19, el SARS-CoV-2, es un virus de ARN de sentido positivo monocatenario que está estrechamente relacionado con el coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV). Los estudios sobre las proteínas SARS-CoV han revelado un papel potencial para IMPα / β1 durante la infección en el cierre nucleocitoplasmático dependiente de la señal de la proteína nucleocápside SARS-CoV ( Rowland et al., 2005 ; Timani et al., 2005 ; Wulan et al., 2015 ), que puede afectar la división celular del huésped ( Hiscox et al., 2001 ; Wurm et al., 2001 ). Además, se ha demostrado que la proteína accesoria ORF6 del SARS-CoV antagoniza la actividad antiviral del factor de transcripción STAT1 al secuestrar IMPα / β1 en la membrana rugosa ER / Golgi (Frieman et al., 2007 ). Tomados en conjunto, estos informes sugieren que la actividad inhibitoria del transporte nuclear de ivermectina puede ser efectiva contra el SARS-CoV-2.
Para probar la actividad antiviral de la ivermectina hacia el SARS-CoV-2, infectamos las células Vero / hSLAM con el aislado SARS-CoV-2 Australia / VIC01 / 2020 a un MOI de 0.1 durante 2 h, seguido de la adición de 5 μM de ivermectina. El sobrenadante y los sedimentos celulares se cosecharon en los días 0-3 y se analizaron por RT-PCR para la replicación del ARN del SARS-CoV-2 ( Fig. 1A / B). A las 24 h, hubo una reducción del 93% en el ARN viral presente en el sobrenadante (indicativo de viriones liberados) de muestras tratadas con ivermectina en comparación con el vehículo DMSO. Del mismo modo, se observó una reducción del 99,8% en el ARN viral asociado a células (indicativo de viriones no liberados y no empaquetados) con el tratamiento con ivermectina. A las 48 h, este efecto aumentó a una reducción de ~ 5000 veces del ARN viral en las muestras tratadas con ivermectina en comparación con las muestras de control, lo que indica que el tratamiento con ivermectina resultó en la pérdida efectiva de esencialmente todo el material viral en 48 h. De acuerdo con esta idea, no se observó ninguna reducción adicional en el ARN viral a las 72 h. Como hemos observado anteriormente ( Lundberg et al., 2013 ; Tay et al., 2013 ; Wagstaff et al., 2012), no se observó toxicidad de la ivermectina en ninguno de los puntos de tiempo analizados, ni en los pocillos de la muestra ni en muestras de fármaco analizadas en paralelo.
Para determinar aún más la efectividad de la ivemectina, las células infectadas con SARS-CoV-2 se trataron con diluciones en serie de ivermectina 2 h después de la infección y se recogieron el sobrenadante y los sedimentos celulares para RT-PCR en tiempo real a las 48 h . Como se indicó anteriormente, se observó una reducción> 5000 en el ARN viral tanto en el sobrenadante como en los sedimentos celulares de las muestras tratadas con ivermectina 5 μM a las 48 h, lo que equivale a una reducción del 99,98% en el ARN viral en estas muestras. Nuevamente, no se observó toxicidad con ivermectina en ninguna de las concentraciones probadas. Se determinó que la IC50 del tratamiento con ivermectina era ~ 2 μM en estas condiciones. Subrayando el hecho de que el ensayo de hecho detectó específicamente SARS-CoV-2, los experimentos de RT-PCR se repitieron usando cebadores específicos para el gen viral RdRp ( Fig. 1E / F) en lugar del gen E (arriba), con resultados casi idénticos observados tanto para el virus liberado (sobrenadante) como para el virus asociado a las células.
Tomados en conjunto, estos resultados demuestran que la ivermectina tiene acción antiviral contra el aislado clínico de SARS-CoV-2 in vitro , con una dosis única capaz de controlar la replicación viral en 24 a 48 h en nuestro sistema. Presumimos que esto es probable mediante la inhibición de la importación nuclear de proteínas virales mediada por IMPα / β1, como se muestra para otros virus de ARN ( Tay et al., 2013 ; Wagstaff et al., 2012 ; Yang et al. 2020 ); confirmación de este mecanismo en el caso del SARS-CoV-2, e identificación del SARS-CoV-2 específico y / o los componentes del huésped afectados ( Yang et al., 2020) es un enfoque importante para el trabajo futuro en este laboratorio. En última instancia, el desarrollo de un antiviral eficaz para el SARS-CoV-2, si se administra a los pacientes en una etapa temprana de la infección, podría ayudar a limitar la carga viral, prevenir la progresión grave de la enfermedad y limitar la transmisión persona-persona. Pruebas de evaluación comparativa de la ivermectina contra otros antivirales potenciales para el SARS-CoV-2 con mecanismos de acción alternativos ( D**g et al., 2020 ; Elfiky, 2020 ; Gordon et al., 2020 ; Li y De Clercq, 2020 ; Wang et al., 2020 ) sería importante tan pronto como sea posible. Este breve informe plantea la posibilidad de que la ivermectina pueda ser un antiviral útil para limitar el SARS-CoV-2, de manera similar a los ya informados (D**g et al., 2020 ; Elfiky, 2020 ; Gordon et al., 2020 ; Li y De Clercq, 2020 ; Wang et al., 2020 ); hasta que se pruebe que uno de estos es beneficioso en un entorno clínico, todos deben llevarse a cabo lo más rápido posible.
Ivermectin tiene un perfil de seguridad establecido para uso humano ( Gonzalez Canga et al., 2008 ; Jans et al., 2019 ; Buonfrate et al., 2019 ), y está aprobado por la FDA para una serie de infecciones parasitarias ( Gonzalez Canga et al. , 2008 ; Buonfrate et al., 2019 ). Es importante destacar que las revisiones recientes y el metanálisis indican que la dosis alta de ivermectina tiene una seguridad comparable a la del tratamiento estándar de dosis baja, aunque no hay evidencia suficiente para sacar conclusiones sobre el perfil de seguridad en el embarazo ( Navarro et al., 2020 ; Nicolas et al ., 2020) El siguiente paso crítico en una evaluación adicional para un posible beneficio en pacientes con COVID-19 será examinar un régimen de dosificación de adición múltiple que imite el uso actual aprobado de ivermectina en humanos. Como se señaló, la ivermectina fue el foco de un reciente ensayo clínico de fase III en pacientes con dengue en Tailandia, en el que se encontró que una sola dosis diaria era segura pero no producía ningún beneficio clínico. Sin embargo, los investigadores señalaron que se podría desarrollar un régimen de dosificación mejorado, basado en datos farmacocinéticos ( Yamasmith et al., 2018) Aunque DENV es claramente muy diferente al SARS-CoV-2, este diseño de prueba debería informar el trabajo futuro en el futuro. En conjunto, el informe actual, combinado con un perfil de seguridad conocido, demuestra que la ivermectina es digna de mayor consideración como un posible antiviral SARS-CoV-2.
Referencias
Buonfrate et al., 2019 D. Buonfrate , et al.
Dosis versus dosis única de ivermectina para la infección por Strongyloides stercoralis (Strong Treat 1 a 4): un ensayo multicéntrico, abierto, de fase 3, aleatorizado de superioridad controlada Lancet Infect. Dis. , 19 ( 11 ) ( 2019 ) , págs. 1181 - 1190
Caly et al., 2012 L. Caly , KM Wagstaff , DA Jans Tráfico nuclear de proteínas de virus ARN: ¿objetivo potencial para antivirales? Antivir. Res. , 95 ( 2012 ) , págs. 202 - 206
Corman et al., 2020 VM Corman , y col. Detección de nuevos coronavirus 2019 (2019-nCoV) por RT-PCR en tiempo real
Euro Surveill. , 25 ( 3 ) ( 2020 )
D**g et al., 2020 L. D**g , S. Hu , J. Gao Descubriendo medicamentos para tratar la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) Drug Discov. El r. , 14 ( 1 ) ( 2020 ) , pp. 58 - 60
Elfiky, 2020 AA Elfiky Anti-HCV, inhibidores de nucleótidos, reutilización contra COVID-19 Life Sci. , 248 ( 2020 ) , pág. 117477
Frieman et al., 2007 M. Frieman , et al. El coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo ORF6 antagoniza la función STAT1 al secuestrar factores de importación nuclear en el retículo endoplásmico rugoso / membrana de Golgi
J. Virol. , 81 ( 18 ) ( 2007 ) , pp. 9.812 mil - 9824
Gonzalez Canga et al., 2008 A. Gonzalez Canga , y col.
La farmacocinética e interacciones de la ivermectina en humanos: una mini revisión AAPS J. , 10 ( 1 ) ( 2008 ) , págs. 42 - 46
Gordon et al., 2020 CJ Gordon , y col. El compuesto antiviral remdesivir inhibe potentemente la ARN polimerasa dependiente de ARN del coronavirus del síndrome respiratorio de Oriente Medio J. Biol. Chem , 295 ( 15 ) ( 10 de abril de 2020 ) , págs. 4773 - 4779
Gotz et al., 2016 V. Gotz , et al. Los virus de la influenza A escapan de la restricción MxA a expensas de la importación eficiente de vRNP nuclear Sci. Rep. , 6 ( 2016 ) , pág. 23138
Hiscox et al., 2001 JA Hiscox , y col. La nucleoproteína del virus de la bronquitis infecciosa por coronavirus se localiza en el nucleolo J. Virol. , 75 ( 1 ) ( 2001 ) , págs. 506 - 512
Jans et al., 2019 DA Jans , AJ Martin , KM Wagstaff
Inhibidores del transporte nuclear Curr. Opin. Cell Biol. , 58 ( 2019 ) , pp. 50 - 60
Ketkar et al., 2019 H. Ketkar , et al. Falta de eficacia de la ivermectina para la prevención de una infección letal por el virus del Zika en un sistema murino Diagn. Microbiol Infectar. Dis. , 95 ( 1 ) ( 2019 ) , pp. 38 - 40
Kosyna et al., 2015 FK Kosyna , et al. El inhibidor específico de importina alfa / beta Ivermectina afecta las vías de respuesta a la hipoxia dependientes de HIF
Biol. Chem , 396 ( 12 ) ( 2015 ) , págs. 1357 - 1367
Li y De Clercq, 2020 G. Li , E. De Clercq Opciones terapéuticas para el nuevo coronavirus 2019 (2019-nCoV)
Nat. Rev. Drug Discov. , 19 ( 3 ) ( 2020 ) , págs. 149 - 150
Lundberg et al., 2013 L. Lundberg , et al.
Los inhibidores nucleares de importación y exportación alteran la distribución de proteínas de la cápside en células de mamíferos y reducen la replicación del virus de la encefalitis equina venezolana Antivir. Res. , 100 ( 3 ) ( 2013 ) , pp. 662 - 672
Lv et al., 2018 C. Lv , y col. La ivermectina inhibe la ADN polimerasa UL42 de la entrada del virus de la seudorrabia en el núcleo y la proliferación del virus in vitro y vivo
Antivir. Res. , 159 ( 2018 ) , pp. 55 - 62
Mastrangelo et al., 2012 E. Mastrangelo , et al. La ivermectina es un potente inhibidor de la replicación de flavivirus dirigido específicamente a la actividad helicasa NS3: nuevas perspectivas para un fármaco antiguo
J. Antimicrob. Chemother , 67 ( 8 ) ( 2012 agosto ) , pp. 1884 - 1894
Navarro et al., 2020 M. Navarro , et al. Seguridad de altas dosis de ivermectina: una revisión sistemática y metaanálisis
J. Antimicrob. Chemother , 75 ( 4 ) ( 2020 ) , págs. 827 - 834
Nicolas et al., 2020 P. Nicolas , et al. Seguridad de la ivermectina oral durante el embarazo: una revisión sistemática y metaanálisis Lancet Global Health , 8 ( 1 ) ( 2020 ) , págs. E92 - e100
Ono et al., 2001 N. Ono , et al. Los virus del sarampión en los frotis de garganta de pacientes con sarampión usan una molécula de activación linfocítica de señalización (CDw150) pero no CD46 como receptor celular
J. Virol. , 75 ( 9 ) ( 2001 ) , págs. 4399 - 4401
Rowland et al., 2005 RR Rowland , y col. Localización intracelular de la proteína nucleocápside del coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo: ausencia de acumulación nucleolar durante la infección y después de la expresión como proteína recombinante en células vero
J. Virol. , 79 ( 17 ) ( 2005 ) , págs. 11507 - 11512
Tay et al., 2013 MY Tay , y col. Localización nuclear del virus del dengue (DENV) 1-4 proteína no estructural 5; protección contra los 4 serotipos DENV por el inhibidor Ivermectin
Antivir. Res. , 99 ( 3 ) ( 2013 ) , págs. 301 - 306
Timani et al., 2005 KA Timani , y col. Propiedades de localización nuclear / nucleolar de la proteína nucleocápside C-terminal del coronavirus del SARS Virus Res. , 114 ( 1–2 ) ( 2005 ) , págs. 23 - 34
van der Watt et al., 2016 PJ van der Watt , y col. Dirigido al receptor de importación nuclear Kpnbeta1 como agente terapéutico contra el cáncer Mol. Canc. Terapéutica. , 15 ( 4 ) ( 2016 ) , págs. 560 - 573
Wagstaff et al., 2011 KM Wagstaff , y col. Un ensayo basado en AlphaScreen (R) para la detección de alto rendimiento para inhibidores específicos de importación nuclear
J. Biomol. Screen , 16 ( 2 ) ( 2011 ) , págs. 192 - 200
Wagstaff et al., 2012 KM Wagstaff , y col. La ivermectina es un inhibidor específico de la importación nuclear importada alfa / beta mediada capaz de inhibir la replicación del VIH-1 y el virus del dengue Biochem. J. , 443 ( 3 ) ( 2012 ) , págs. 851 - 856
Wang et al., 2020 M. Wang , et al. Remdesivir y la cloroquina inhiben eficazmente el nuevo coronavirus recién surgido (2019-nCoV) in vitro Cell Res. , 30 ( 3 ) ( 2020 ) , págs. 269 - 271
Wulan et al., 2015 WN Wulan , y col. Transporte nucleocitoplasmático de proteínas nucleocápsides de virus de ARN envueltos Frente. Microbiol , 6 ( 2015 ) , p. 553
Wurm et al., 2001 T. Wurm , et al. La localización en el nucleolo es una característica común de las nucleoproteínas de coronavirus, y la proteína puede alterar la división celular del huésped. J. Virol. , 75 ( 19 ) ( 2001 ) , págs. 9345 - 9356
Yamasmith et al., 2018 E. Yamasmith , y col. Eficacia y seguridad de la ivermectina contra la infección por dengue: un ensayo de fase III, aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo La 34ª Reunión Anual del Royal College of Physicians of Thailand , Internal Medicine and One Health , Chonburi, Tailandia ( 2018 )
Yang et al., 2020 SNY Yang , y col. El ivermectina antiviral de amplio espectro se dirige al heterodímero alfa / beta1 del transporte nuclear del huésped importina
Antivir. Res. ( 2020 ) , pág. 104760
